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本试剂盒依据一种常温恒温核酸快速扩增技能:在常温恒温下,特别润饰的反转录酶运用特异性引物和模板RNA组成cDNA链,反响系统中的重组酶、单链 DNA 结合蛋白和 DNA 聚合酶以新组成的 cDNA 链为模板进行快速核酸扩增反响。依靠nfo 酶的效果,参加依据模板规划的特异的分子探针,运用胶体金技能(三明治夹心法)可以对终究成果进行检测。
本试剂盒具有灵敏度较高、特异性强、反响时间短(仅需 12 min)等长处,反响组分为干粉状况,操作简略快捷,易于保存。本试剂对设备要求低,金属浴、水浴锅等即可进行反响操作,无需购买 PCR 扩增仪等价格昂扬的专属设备。
主张运用长度在 30-35 bp 的引物,引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度;下流引物的 5’端符号一个润饰基团(常用生物素)。引物规划防止构成二级结构而影响扩增;扩增
在上下流引物中心,规划一段长度为46-52nt与意图片段互补的序列;5’端润饰一个抗原符号(典型 FAM);在 5’端和 3’结尾的中部方位符号一个 dSpacer(四氢呋喃,THF),作为 nfo 的辨认位点;3’结尾符号一个润饰基团,例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer 等。
2.贮存条件:贮存温度 ≤ -20 °C(± 5 °C)恒温环境,避光保存,防止重压、重复冻融;